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                  人白介素12(IL-12)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

                  发布时间:2022-01-24    点击次数:175

                  人白介素12(IL-12)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
                   

                  本试剂盒仅供研究使用

                  检测范围: 96T

                  1 ng/L -60 ng/L

                  使用目的:

                  本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白介素 12(IL-12)含量。

                  实验原理

                  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素 12(IL-12)水平。用纯化的人白介素12(IL-12)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素 12(IL-12), 再与 HRP 标记的白介素 12(IL-12)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素 12(IL-12)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人白介素 12(IL-12)浓度。

                  试剂盒组成:

                  试剂盒组成48 孔配置96 孔配置保存

                  说明书1 份1 份

                  封板膜2 片(48)2 片(96)

                  密封袋1 个1 个

                  酶标包被板1×481×962-8℃保存

                  标准品:540μg/L0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存

                  标准品稀释液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存

                  酶标试剂3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

                  样品稀释液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

                  显色剂 A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

                  显色剂 B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

                  终止液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

                  浓缩洗涤液(20ml×20 倍)×1 瓶(20ml×30 倍)×1 瓶2-8℃保存

                  人白介素12(IL-12)酶联免疫分析试剂盒

                  标本要求

                  1. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

                  2. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

                  操作步骤

                  1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

                  60 ng/L5 号标准品150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液

                  30 ng/L4 号标准品150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

                  15 ng/L3 号标准品150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

                  7.5 ng/L2 号标准品150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

                  3.75 ng/L1 号标准品150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

                  2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,

                  然后再加待测样品 10µl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽

                  量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

                  3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

                  4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

                  5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。

                  6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

                  7. 温育:操作同 3。

                  8. 洗涤:操作同 5。

                  9. 显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

                  15 分钟.

                  10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

                  11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

                  操作程序总结:

                   

                   

                  计算

                  以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

                  即为样品的实际浓度。

                  人试剂盒白介素12(IL-12)酶联免疫分析试剂盒

                  注意事项

                  1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

                  2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

                  3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间建议控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

                  4. 请每次测定的同时做标准曲线,建议做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

                  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。

                  7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

                  8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

                  9. 本试剂不同批号组分不得混用。

                  10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

                  保存条件及有效期

                  1. 试剂盒保存:;2-8℃。

                  2. 有效期:6 个月

                  如果您有任何问题,请跟我们联系!

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